沉默CENP-N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

作者：张玉扬; 赵津平; 张丹; 翟振华^*

来源：广东医学, 2022, 43(04): 426-433.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.20210908

• 着丝粒蛋白-N
• 胃癌
• 磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路
• 增殖
• 凋亡

目的 探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响，并分析其可能机制。方法 利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平；以收集的143例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803及人胃黏膜细胞GES1为研究对象，qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平，Western blot检测CENP-N蛋白表达；体外培养胃癌SNU-1细胞株，分为空白对照组、siRNA-NC组(阴性对照组)、CENP-N-siRNA组(沉默CENP-N表达组)、通路激活剂组(CENP-N-siRNA+740Y-P组)。qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平；CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况；免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果 利用GEPIA网站发现CENP-N mRNA在胃癌组织、癌旁组织中的表达分别为4.25±0.36、1.45±0.21,差异有统计学意义(P<0.05);与癌旁组织比较，胃癌组织中CENP-N mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与GES1细胞比较，CENP-N mRNA在胃癌SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803细胞中的表达水平显著升高，且CENP-N mRNA在SNU-1细胞中的表达水平最高，因此，选择SNU-1细胞进行后续实验研究。细胞成功转染；与空白对照组、siRNA-NC组比较，CENP-N-siRNA组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著降低(P<0.05);与CENP-N-siRNA组比较，通路激活剂组SNU-1细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达显著升高(P<0.05)。结论 沉默CENP-N表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡，可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的。

• 单位
  锦州医科大学