基于JAK2/STAT3信号通路探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

作者：刘宁; 战昕卓; 于慧; 陈晓丽; 孔祥图; 倪海雯^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(13): 10-19.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222430

• 芪苓白头翁汤
• 弥漫大B细胞淋巴瘤
• OCI-LY10细胞
• U2932细胞
• 增殖
• 细胞周期
• 凋亡
• 非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)
• 白细胞介素-10(IL-10)

目的：探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡、非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎症因子白细胞介素-10(IL-10)的影响。方法：以人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞增殖情况，并计算出0、4.6、9.3、18.7、37.5、75、150 mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后的半抑制浓度(IC50)分别为9.33、16.13 mg·L-1。后续相关实验根据芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h半抑制浓度(IC50)，选用芪苓白头翁汤9.5、19、38 mg·L-1开展实验。用胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9酶原活化检测试剂盒检测经0、9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活化情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测经0、9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中IL-10炎症因子表达情况。流式细胞仪检测不同浓度芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3 (cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况及JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况，不同浓度药物作用OCI-LY10、U2932细胞24h,OCI-LY10、U2932细胞中癌基因(c-Myc)蛋白表达情况。结果：芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h，与空白组比较，芪苓白头翁汤各组细胞增殖均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01)，细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01)，细胞于DNA合成前期(G1)阻滞增加(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38mg·L-1芪苓白头翁汤组OCI-LY10、U2932细胞中Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。与空白组比较，19 mg·L-1芪苓白头翁汤组、19mg·L-1芪苓白头翁汤+10μg·L-1IL-10组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),10μg·L-1 IL-10组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)，通路蛋白JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。结论：芪苓白头翁汤可以抑制人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与芪苓白头翁汤调控JAK2/STAT3信号通路有关。

• 单位
  第一临床医学院; 南京中医药大学; 江苏省中医院