IPTG诱导变形链球菌葡糖基转移酶可溶性表达及活性初步测定

作者：汪林; 储冰峰; 王成龙; 刘洪臣; 邵宁生; 杨光; 董洁; 刘玉

来源：中华老年口腔医学杂志, 2010, (02): 94-97.

• 变形链球菌
• 葡糖基转移酶
• 大肠杆菌 S.mutans
• Glucosyltransferase
• Escherichia coli

目的:提取变形链球菌GS5葡糖基转移酶GTF(glucosyltransferase)催化活性区(CAT)的基因,利用IPTG诱导后获得可溶性表达,并检测活性。方法:利用PCR技术克隆CAT的基因片段,通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌BL21中表达,利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含有质粒pET32-NusA-CAT的大肠杆菌,SDS-PAGE电泳进行检测;采用蒽酮硫酸法验证活性。结果:成功将CAT基因连入大肠杆菌BL21,获得可溶性的融合蛋白表达;并且融合蛋白具有生物学活性。结论:IPTG成功诱导克隆的变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区基因并获得可溶性融合蛋白的表达,具有...

• 单位
  中国人民解放军总医院; 军事医学科学院基础医学研究所