基于混合气体法的H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型建立及优化研究

作者：陈雨; 李艳; 周子妍; 刘红宁; 徐国良; 姜丽^*

来源：中药新药与临床药理, 2020, 31(09): 1123-1127.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2020.09.018

• H9c2心肌细胞
• 缺氧/复氧模型
• 混合气体法
• 细胞存活率
• 乳酸脱氢酶活性
• 正交试验

目的比较移动式三气培养箱和厌氧产气袋密闭培养盒2种混合气体法建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型的优缺点,并进一步对培养条件进行优化。方法将处于对数生长期的H9c2心肌细胞分别置于移动式三气培养箱(94%N2、5%CO2、1%O2)和厌氧产气袋密闭培养盒(21%CO2、5%O2)中,分别缺氧不同时间(2、4、6、8、10 h),再进行复氧(95%O2、5%CO2)4 h。采用MTS法检测心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性。采用L(934)正交试验进一步对细胞缺氧时间(6、8、10 h)和细胞培养液条件(血清比例、血糖含量)进行优化,最终确定模型建立的最佳缺氧时间和培养条件。结果 2种造模方法均能使心肌细胞存活率下降,乳酸脱氢酶活性升高。但采用移动式三气培养箱造模的心肌细胞存活率在缺氧4 h后能稳步快速下降(6、8、10 h,与正常对照组比较,P <0.01),LDH活性随着缺氧时间的延长明显增高(6、8、10 h,与正常对照组比较,P <0.01),且该模型重复性较好,稳定可控。而厌氧产气袋模型组的细胞存活率及LDH活性均不随时间规律性变化,较难在短时间内建立稳定、可靠的模型。正交试验结果以缺氧6 h、无糖、无血清作为优化培养条件。结论选择移动式三气培养箱法建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型用时短、操作简便,结果相对稳定,将培养液更换为无血清、无糖培养液可加快模型的建立。

• 单位
  江西中医药大学药学院; 江西省中药药理学重点实验室; 江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心; 江西省中医病因生物学重点实验室