人脂联素基因重组腺病毒的构建与鉴定

作者：李丙蓉; 郑宏庭; 邓华聪; 郑丹; 刘金波; 兰丽珍; 程伟

来源：重庆医科大学学报, 2010, (11): 1676-1680.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2010.11.003

• apM1基因
• 腺病毒
• 同源重组 apM1 gene
• Adenovirus
• Homogenous recombination

目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒pShuttle-CMV经SalⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,连接、转化、筛选,进行PCR鉴定后送双向测序。将鉴定正确的重组质粒pShuttle-CMV-apM1用PmeⅠ酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转BJ5183菌,进行细菌内同源重组,筛选、鉴定、扩增,PacⅠ酶切后用LipofectamineTM2000转染低代数的HEK...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院