溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性

作者：曾福源; 伍艳清; 邱明生; 武沛文; 周诗慧; 王俊霖; 简纪常; 谢妙; 庞欢瑛^*

来源：安徽农学通报(上半月刊), 2020, 26(18): 101-105.

DOI：10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2020.18.042

• 溶藻弧菌
• VscQ
• Ⅲ型分泌系统
• 原核表达
• 免疫原性

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(NO.MN862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析。结果显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa。将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEXvscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,能在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。

• 单位
  广东海洋大学深圳研究院; 广东海洋大学; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东省教育厅