实时荧光RT-PCR法和NASBA方法在呼吸道多病原检测中的应用评价

作者：李爱华; 王雪; 龚成; 罗琴; 罗明; 李茂中; 董梅; 黄芳^*

来源：现代预防医学, 2022, 49(07): 1279-1283.

• 呼吸道多病原
• 实时荧光RT-PCR方法
• NASBA方法

目的 评价实时荧光RT-PCR和核酸依赖性序列扩增法(NASBA)两种方法在呼吸道多病原检测中的应用价值。方法 收集北京地区急性呼吸道感染病例标本140份，分别采用实时荧光RT-PCR方法和NASBA方法对样本进行平行检测并对两种方法的病原检出限、重复性、检测一致性及检测时间等指标进行比较。结果 两种检测方法批内重复CV值均<5%,重复性较好；实时荧光RT-PCR方法对脊灰毒株核酸和H1N1病毒核酸最低检出限分别为5.62 CCID50/0.1 ml(107倍稀释)和103倍稀释度，NASBA方法最低检出限分别为56.2 CCID50/0.1 ml(106倍稀释)和102倍稀释。实时荧光RT-PCR灵敏度略优于NASBA方法。针对两种方法共同检测呼吸道病原体种类，实时荧光RT-PCR和NASBA方法检测阳性率分别为89.28%(125/140)、70%(98/140)。两种方法对甲型H1N1病毒、肠道病毒及新型冠状病毒的检测结果一致性达100%,对甲型流感病毒、甲型H3N2、副流感病毒1-4型的检测结果基本一致，Kappa值范围为0.81～1;对冠状病毒229E/HKU1/OC43/NL63、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和乙型流感病毒的检测结果一致性较好，Kappa值范围为0.61～0.80;对人偏肺病毒的检测结果一致性差，Kappa值仅为0.55。实时荧光RT-PCR方法检测时间为90 min, NASBA方法仅需40 min即可完成。结论 实时荧光RT-PCR方法灵敏度较高，适合对大批量临床样本进行筛查；NASBA方法检测时间短，不易污染，适用于时限性强但对灵敏度要求不太高的应用场景，如临床上重症呼吸道感染者的快速检测。建议根据不同需求和应用场景，选择合适的检测方法和产品。

• 单位
  首都医科大学; 公共卫生学院; 北京市预防医学研究中心; 北京市疾病预防控制中心