干扰素受体1沉默的人二倍体MRC-5细胞系对水痘-带状疱疹病毒复制的影响

作者：杨骁; 姜承瀚; 孙博; 谷铁军; 万明明; 孙捷; 丁雪; 王岑嵘; 周恩同; 姜皓^*; 苏维恒^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(01): 21-31.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003787

• 水痘-带状疱疹病毒
• 人二倍体MRC-5细胞
• 干扰素应答
• 基因沉默

目的 通过优化人二倍体细胞系MRC-5降低其干扰素(interferon,IFN)相关基因表达水平，以提高水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)在该细胞系中的复制水平，并提高VZV疫苗产量。方法 通过CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建IFN受体1(interferon receptor 1,IFNAR1)沉默的MRC-5细胞系(MRC-5IFNAR1-)。采用qRT-PCR法检测MRC-5IFNAR1-细胞系IFNAR1 mRNA相对表达量，同时检测VZV感染后IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量，评价基因沉默效果。通过沉默位点的基因测序进一步鉴定基因突变序列。采用qRT-PCR法和空斑形成单位(plaque formation unit,PFU)试验，对比VZV感染后168 h病毒在MRC-5和MRC-5IFNAR1-细胞系中的复制情况，评价MRC-5IFNAR1-细胞系对VZV复制的影响。结果 MRC-5IFNAR1-细胞系生长状态与MRC-5细胞一致，IFNAR1 mRNA相对表达量降低73%;VZV感染后MRC-5IFNAR1-细胞系中IFN相关基因IFNβ和OAS1 mRNA相对表达量比MRC-5细胞分别降低了61%和90%;VZV感染后168 h，病毒DNA复制水平增加5.7倍，病毒滴度增加4倍。结论 成功建立了MRC-5IFNAR1-细胞系，可作为增加基于人二倍体细胞疫苗产量的潜在方案，为扩大VZV疫苗生产提供了参考。

• 单位
  延边大学; 吉林大学中日联谊医院; 吉林大学; 生命科学学院