定点突变提高D-氨甲酰水解酶的可溶性表达

作者：袁野; 蔡渊恒; 姜世民; 姜卫红

来源：生物技术通报, 2012, (01): 94-98.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2012.01.035

• D-氨甲酰水解酶
• 定点突变
• 诱导表达
• 可溶性
• 酶活 D-carbamoylase Site-directed mutagenesis Induced expression Solubility Enzyme activity

采用定点突变的方法对皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pickettii)来源的D-氨甲酰水解酶(D-carbamoylase,DCase)编码基因的3个位点A18、Y30、K34进行突变,并将获得的突变体基因片段构建入高表达载体pET-28b中,转化E.coliBL21(DE3),获得带有组合三突变(A18E/Y30D/K34E)的DCase-SM表达菌株BL21/pET-DCSM。当以IPTG诱导目的蛋白表达时,发现突变菌株(DCase-SM)与出发菌株(DCase)菌株相比,目的蛋白的可溶性表达显著提高,其可溶蛋白比例约为64%;与出发菌株相比,其单位菌体酶活增加427%;另...

• 单位
  中国科学院; 吉林大学