腈水解酶重组菌的培养工艺及磁性固定化研究

作者：商玉婷; 龚劲松; 王顺治; 陆震鸣; 李恒; 史劲松; 许正宏^*

来源：食品与发酵工业, 2021, 47(16): 128-134.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027565

• 腈水解酶
• 烟酸
• 生物转化
• 发酵
• 固定化

该实验室前期构建了1株高产重组腈水解酶的Bacillus subtilis pMA5-NITR,可以转化3-氰基吡啶生产烟酸。该研究分别采取分批培养、恒速补料培养和恒pH培养等策略对产腈水解酶重组菌进行发酵培养,以期获得具有高催化活性的腈水解酶静息细胞。为进一步提高细胞中腈水解酶的稳定性,采用氨基化核壳结构磁性Fe3O4纳米粒子对重组腈水解酶进行固定化并对制备条件进行优化。此外,通过考察磁性固定化细胞的温度稳定性、底物耐受性和初始底物浓度对转化效率的影响,确定磁性固定化细胞转化3-氰基吡啶为烟酸的工艺条件,以进一步增强重组腈水解酶的烟酸生产能力。结果表明,恒pH培养策略效果最佳,重组腈水解酶活力可达167.32 U/mL,是分批培养的2.64倍。重组酶的磁性固定化细胞具有更高的耐受性,在450 min内可以完全转化30批次底物,累积生成烟酸质量浓度达到738.66 g/L,是游离细胞的2.5倍,酶活力和烟酸转化产量均是目前报道的枯草芽孢杆菌来源腈水解酶的最高记录。该研究通过对不同培养方式的探索及磁性固定化策略的应用,提高了重组腈水解酶的生物转化潜力,在工业生产烟酸上具有良好的应用价值。

• 单位
  江南大学; 生物工程学院