稳定表达人survivin基因的B16细胞系的建立与鉴定

作者：张亮; 李潇潇; 阎瑾琦; 王越; 肖毅; 高昆; 于继云

来源：第二军医大学学报, 2010, (04): 359-363.

• survivin
• 稳定转染
• 实验性黑素瘤
• 基因疫苗
• 肿瘤免疫治疗 survivin
• stably transfection
• experimental melanoma
• gene vaccine
• tumor immunotherapy

目的构建人survivin真核表达载体,稳定转染入小鼠黑素瘤B16细胞,建立稳定表达人survivin的小鼠黑素瘤细胞系。方法采用PCR方法扩增出人survivin全长基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-SUR-(his)6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。利用RT-PCR、蛋白免疫印迹及免疫荧光等检测方法验证人survivin基因在稳定转染B16细胞株中的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-...

• 单位
  北京积水潭医院; 军事医学科学院基础医学研究所