摘要
目的研究武汉地区戊型肝炎病毒(HEV)基因型及HEV开放读码框架3(ORF3)基因序列的准种特点。方法应用逆转录-巢式聚合酶链反应法(RT-nested-PCR)扩增HEV开放读码框架2(ORF2)的部分序列,选取其中25份进行测序,用Clustal X和Mega软件比较武汉地区HEV序列与4个HEV主要代表株序列;并扩增其中2份HEV开放读码框架3(ORF3)的全部序列,克隆入pMD18-T Vector,其中1例挑选30个克隆进行DNA测序。结果25例HEV-ORF2核苷酸同源性为82.61%~98.55%,与Ⅰ型(缅甸株)、Ⅱ型(墨西哥株)、Ⅲ型(美国株)、Ⅳ型(中国/台湾株)核苷酸同源性分别为76.52%~81.74%、70.43%~73.04%、76.52%~81.16%和84.35%~88.70%。来源于同一患者ORF3区全基因组不同克隆之间的碱基序列同源性为97.97%~99.71%,与Ⅳ型(中国/台湾株)核苷酸同源性为89.86%~99.71%。ORF3区可检出点突变、缺失突变、短序列的插入突变。结论武汉地区散发性戊型肝炎患者以HEVⅣ型感染为主。多克隆测序结果提示患者体内HEV呈现准种群共存,HEV-ORF3 C末端第2个富含脯氨酸区多有点突变,点突变不影响脯氨酸表达,这些变异的临床意义值得进一步研究。
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