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摘要
目的 通过网络药理学和体外实验探讨瓜蒌-薤白药对（Gualou-Xiebai herb pair, GXHP）抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的作用机制。方法 利用TCMSP、DrugBank、GeneCards和Therapeutic Target等数据库筛选并收集GXHP的潜在成分、抗AS效应靶点；通过Cytoscape软件将药物靶点与疾病靶点进行网络化展示，通过网络拓扑算法筛选出关键靶基因；并通过STRING数据平台构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction, PPI）网络；京都基因和基因组数据库（Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG）分析GXHP抗AS所涉及的核心通路。采用CCK-8法检测不同浓度GXHP对Raw264.7细胞的增殖抑制情况；以氧化型低密度脂蛋白（oxidized-low density lipoprotein, ox-LDL）处理Raw264.7细胞48 h，形成泡沫细胞；将细胞分为5组，分别为空白组（无处理）、模型组（80μg/mL ox-LDL处理）、GXHP低剂量组（80μg/mL ox-LDL+0.2 g/L GXHP）、GXHP中剂量组（80μg/mL ox-LDL+0.6 g/L GXHP）和GXHP高剂量组（80μg/mL ox-LDL+1.8 g/L GXHP）；气相色谱质谱法（gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS）和ELISA法分别检测各组总胆固醇（total cholesterol, TC）、游离胆固醇（free cholesterol, FC）以及炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的表达；Western blot法检测各组MAPK信号通路核心蛋白，包括磷酸化细胞外信号调节激酶（phosphorylated-extracellular signal-regulated kinases, p-ERK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated-p38 mitogen-activated protein kinase, p-p38MAPK）和磷酸化细胞核因子p65(phosphorylated-p65, p-p65)的表达。结果 确定GXHP含有21种成分，包括槲皮素、亚麻酸乙酯、香叶木素等；21种成分分别对应154个作用靶点和36个核心靶点；KEGG分析发现核心靶点参与多种信号通路，包括脂质和AS、MAPK和PI3K-Akt等信号通路。体外实验结果显示，GXHP浓度在4 g/L时可显著抑制Raw264.7细胞的增殖（P<0.01），并选用1.8、0.6、0.2 g/L作为后续实验处理浓度。与空白组比较，模型组可见大量橘红色脂质颗粒，TC及FC的表达水平显著升高（P<0.01），细胞上清液中IL-6、ICAM-1的表达水平显著升高（P<0.01）,p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-p65/p65的相对表达水平明显升高（P<0.01）。与模型组相比，GXHP高、中剂量组TC及FC的表达明显降低（P<0.01）,GXHP高、中、低剂量组IL-6的表达明显下调（P<0.01）;GXHP高、中剂量组ICAM-1的表达明显下调（P<0.01）,GXHP高、中、低剂量组中p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK和p-p65/p65相对表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论 网络药理学分析联合体外实验表明，GXHP可能通过抑制MAPK信号通路实现抗AS效应。
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