中华蜜蜂AcerOr1基因昆虫表达载体pIB/V5-His的构建及功能分析

作者：郭丽娜; 赵慧婷; 任有蛇; 徐兵; 姜玉锁^*

来源：福建农业学报, 2020, 35(04): 359-365.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2020.04.001

• 中华蜜蜂
• 气味受体AcerOr1
• pIB/V5-His
• 表达
• 亚细胞定位
• 功能分析

【目的】构建能在Sf9昆虫细胞中稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr1的重组表达载体,并对其功能进行分析。【方法】将目的基因AcerOr1和昆虫表达载体pIB/V5-His载体用Bam HI和EcoRI做双酶切,通过T4DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr1的表达载体pIB/V5-AcerOr1。将重组表达载体用脂质体转染的方法转染至Sf9细胞中,利用免疫荧光和Western blot检测AcerOr1蛋白的亚细胞定位和表达情况;利用全波长多功能酶标仪检测该受体对4种花香物质刺激后细胞内Ca2+浓度的变化。【结果】成功构建重组表达载体pIB/V5-AcerOr1并建立稳定转染细胞系;Western blot结果证明重组表达载体能在昆虫细胞Sf9中表达;免疫荧光显示重组表达载体在Sf9细胞膜上表达,与预测结果一致。转染pIB/V5-AcerOr1的细胞受花香物质月桂酸(Lauric acid)、亚麻酸(Linolenic acid)、α-松油醇(α-Terpineol)、十一酸(Undecanoic acid)刺激时,均能引起细胞内Ca2+浓度升高。【结论】构建的重组表达载体pIB/V5-AcerOr1能在Sf9细胞中稳定表达,并具有对气味分子的识别功能。

• 单位
  动物科技学院; 生命科学学院; 山西农业大学