基于高分辨率熔解曲线检测MD肿瘤微卫星不稳定性

作者：史泽风; 李翎旭; 郭译文; 廖云; 孙昭宇; 王来荣; 杨德吉; 姚大伟^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-12.

• 高分辨率熔解曲线
• 马立克病
• 微卫星不稳定性
• 肿瘤

本研究旨在通过高分辨率熔解曲线（HRM）方法检测马立克病（MD）肿瘤中存在的微卫星不稳定现象（MSI）。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克病。采集5只发病鸡的肌肉、肝、脾、血液及肿瘤组织，提取DNA，采用15对扩增微卫星DNA序列的引物进行HRM检测，得到归一化处理的差异熔解曲线，比较分析各组织熔解曲线的差异，分析15个微卫星标记是否存在基因突变即MSI。结果表明，发病鸡的各种临床、病理表现符合为马立克病的特征，病毒meq基因序列与近年来国内流行的MDV强毒株有较高的同源性。HRM分析结果显示MD发病鸡的肌肉、肝、脾、血液、肿瘤组织中微卫星标记PCR扩增后的熔解曲线存在明显的差异，即存在MSI现象，而且不同的病鸡个体和不同的微卫星标记发生MSI的频率不同。15个微卫星标记在5只鸡的病料中存在MSI的微卫星标记的个数分别为14、7、5、3和1。在15个微卫星标记中，MCWO200、MCW0220这两个微卫星标记在所有的病鸡中都存在MSI，而ADL0158微卫星标记在所有的病鸡中都不存在MSI。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序分析进一步证明这些微卫星PCR扩增片段确实存在片段大小不同，碱基序列中存在微卫星重复单位的增多、减少或基因片段的插入或缺失。结果提示，通过HRM分析可以检测MD肿瘤的中的MSI现象，是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

• 单位
  南京农业大学