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摘要
目的建立能在同一PCR反应条件下同时检测SEA、SEB、SEC、SEE的PCR快速检测方法,以用于金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病的快速诊断。方法根据Gen Bank公布的SEA、SEB、SEC、SEE基因的保守序列,利用Vector NTI suite 8软件设计SEA/SEE、SEB/SEC通用PCR引物来特异性扩增相应的基因片段,通过优化反应条件,建立在同一PCR反应条件下同时检测SEs各型的PCR检测方法,同时进行常见食源性致病菌的特异性分析及灵敏度分析,扩增产物进行测序鉴定。结果金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEE引物扩增后电泳片段位于目的片段330 bp处,SEB、SEC片段位于目的片段258 bp处,SEA、SEB、SEC和SEE基因PCR产物的电泳片段位于目的片段的579、602、601和125 bp处,结果均显示引物扩增和PCR扩增产物均有预期大小的目的 DNA片段。本方法中的基因引物的PCR扩增金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、大肠杆菌O157:H 7、副溶血性弧菌、奇异变形杆菌、福氏志贺菌、肠毒素型大肠埃希菌、肠侵袭型大肠埃希菌、肠致病型大肠埃希菌、肠出血型大肠埃希菌均未出现预期大小的目的条带。本方法敏感性达80100 CFU/m L。结论本检测方法所建立的PCR可用于金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、E型别食物中毒的快速诊断和分型检测。
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