沉默轴突导向蛋白4D对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响

作者：陶正贵; 杜静虎; 田葵; 王东华; 龚伟; 陈满宇^*

来源：解放军医学杂志, 2021, 46(01): 11-17.

• 胃癌
• 轴突导向蛋白4D
• 自噬
• 上皮-间质转化

目的探讨沉默轴突导向蛋白4D(Sema4D)对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响。方法将SGC-7901细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组与Sema4D-shRNA3组,构建shRNA Sema4D载体转染至SGC-7901细胞。采用RT-PCR检测各组Sema4D mRNA表达水平;采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;显微镜观察上皮-间质转化形态学变化;Western blotting检测Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、E-cadherin、N-cadherin、波形蛋白表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA1组、Sema4D-shRNA2组和Sema4D-shRNA3组Sema4D mRNA表达水平均明显降低,且Sema4D-shRNA3组明显低于Sema4D-shRNA1组和Sema4D-shRNA2组(P<0.05),选择Sema4D-shRNA3进行后续试验。克隆形成实验结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组克隆形成率明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Sema4D-shRNA3组Ki-67、PCNA、p62、N-cadherin、波形蛋白表达水平明显降低,Beclin1、E-cadherin蛋白表达水平明显升高,Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05)。显微镜观察可见Sema4D-shRNA3组细胞上皮-间质转化受到抑制。结论 shRNA Sema4D可抑制SGC-7901细胞的增殖、自噬、上皮-间质转化,促进其凋亡。

• 单位
  襄阳市中心医院; 湖北文理学院