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摘要
目的：明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）组织中的表达，分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法：采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标本与对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症（nasopharyngeal chronic inflammation,NPI）组织中SETD4蛋白的表达；基于CRISPR/Cas9技术敲除CNE2细胞中SETD4基因，DNA测序结合半定量RTPCR进行鉴定；以SETD4敲除前后的CNE2细胞为研究对象，于倒置显微镜下观察细胞形态，采用CCK-8实验分析细胞增殖活性、Transwell实验观察细胞迁移能力变化、Western blot检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、细胞周期相关蛋白、上皮-间充质转化标志物和组蛋白赖氨酸甲基化的变化，并通过生物信息学富集SETD4相关联的功能和信号通路。结果：SETD4蛋白主要定位于NPC细胞核中，NPC组织中SETD4阳性表达率显著低于NPI对照组（P<0.01）。基于CRISPR/Cas9技术成功敲除了CNE2细胞的SETD4基因，获得基因敲除的纯合子细胞。与野生型（wild-type, WT）细胞株相比，SETD4敲除（knockout, KO）细胞株呈现更明显的梭形和多角形，增殖活性和迁移能力均显著增加（P<0.01）,E-cadherin和p21蛋白表达显著下调（P<0.05），而cyclin D1、cyclin E1、Ncadherin和vimentin蛋白表达则显著上调（P<0.05）。此外，与WT组相比，SETD4KO组细胞中H3K4me2、H3K4me3、H3K9me1、H3K27me3、H3K79me2和H4K20me2水平显著降低（P<0.05）。基因集富集结果显示，SETD4与细胞周期的功能和信号通路相关。结论：临床NPC组织中SETD4蛋白的表达减弱或缺失；SETD4表达减弱通过上调细胞周期相关蛋白促进NPC细胞增殖，通过诱导上皮-间充质转化而促进细胞迁移；SETD4影响NPC细胞中H3K4、H3K9、H3K27、H3K79和H4K20多个位点的甲基化。
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