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摘要
【目的】烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）是危害茄科、十字花科、葫芦科等农作物的重要病毒，给农业生产造成了巨大损失。通过分子克隆获得本氏烟（Nicotiana benthamiana）多蛋白桥梁因子1c(multiprotein bridging factor 1c,MBF1c)，综合应用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段，明确NbMBF1c的抗病毒功能和机制，为作物的抗病毒育种提供理论依据。【方法】根据Sol Genomics Network中报道的NbMBF1c序列全长，设计引物克隆NbMBF1c全长序列；使用GeneDoc及MEGA X对NbMBF1c蛋白和其他物种中的同源蛋白序列进行比对并构建系统进化树；利用生物信息学分析NbMBF1c的基因特征和蛋白结构；使用实时荧光定量PCR检测其组织表达及其在TMV侵染中的表达；利用烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）诱导的基因沉默（virus induced gene silencing,VIGS）技术沉默NbMBF1c后通过摩擦接种TMV-GFP，明确NbMBF1c对病毒侵染的影响；构建pART27-GFP-NbMBF1c和pART27-Myc-NbMBF1c瞬时过表达载体，在本氏烟叶片中表达融合蛋白GFP-NbMBF1c后在共聚焦显微镜下观察亚细胞定位，表达融合蛋白Myc-NbMBF1c后接种病毒观察TMV-GFP侵染情况；采用实时荧光定量PCR检测沉默NbMBF1c后相关激素基因的表达，分析NbMBF1c影响病毒侵染的机制。【结果】NbMBF1c全长441 bp，编码146个氨基酸，包含一个保守结构域HTH(helix-turn-helix)；系统发育分析表明，NbMBF1c与绒毛状烟草（Nicotiana tomentosiformis）MBF1c(XP＿009614458.1)亲缘关系最近；NbMBF1c的表达具有特异性，在根中的表达量最高，其次是茎、叶和花；NbMBF1c定位于细胞质和细胞核中；沉默NbMBF1c会显著影响本氏烟株高，出现矮化等症状，接种TMV-GFP第5天时，沉默处理相较于对照组植株新叶病毒含量更高；瞬时过表达Myc-NbMBF1c融合蛋白，在注射叶接种TMV-GFP后，病毒侵染减少，但NbMBF1c并不与TMV组分互作；沉默NbMBF1c后，脱落酸（abscisic acid,ABA）合成关键酶基因NCED3、脱落酸受体PYL1、ABA信号转导因子ABAI1和蛋白激酶SnRK2E的表达量显著上调；茉莉酸（jasmonic acid,JA）合成途径AOS1上调表达，茉莉酸信号通路上的受体COI1下调表达。【结论】本氏烟MBF1家族NbMBF1c的表达受TMV侵染诱导，且主要定位于细胞质和细胞核。NbMBF1c作为植物抗TMV的正调控因子抑制病毒在本氏烟上的侵染。NbMBF1c不通过与TMV组分互作来抑制病毒侵染，而是通过调控植物激素的产生和信号传导来抑制病毒侵染。
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