猪流行性腹泻病毒HeN21株的分离鉴定及致病性研究

作者：冷超粮^*; 贾楠; 翟洪月; 马秀秀; 田想; 宋佳静; 史鸿飞; 李娜; 姚伦广; 阚云超; 张瑞^*; 田志军

来源：中国预防兽医学报, 2023, 1-7.

• 猪流行性腹泻病毒
• 序列分析
• 遗传变异
• 致病性试验

为了解河南地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行及变异情况，本研究从该地区某疑似感染PEDV的发病猪场采集粪便样品，经RT-PCR检测并测序结果显示，该猪场为PEDV感染。将阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离，并通过RT-PCR扩增、测序及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果显示，分离到一株PEDV，并命名为HeN21株。经PCR分段扩增病毒全基因组，测序、拼接后的结果显示，病毒基因组全长为28 036 bp。为进一步分析HeN21株的遗传演化特征，利用MegAlign分析HeN21株全基因组与GenBank中5株PEDV参考株的核苷酸序列的相似性；采用MEGA 11软件利用NJ法构建HeN21株与GenBank中31株PEDV参考株的S基因系统发育树；采用MegAlign分析HeN21株S蛋白氨基酸序列的变异特征；进一步评价HeN21株对哺乳仔猪的致病性。相似性分析结果显示，HeN21株与PEDV参考株的相似性为96.6%～98.9%，其中与经典株GIa亚型代表株CV777的相似性最低为96.6%，与GIIa亚型代表株AH2012和GIIb亚型代表株AJ1102的相似性均为98.5%。进化树结果显示，HeN21株与GIIa亚型PEDV聚为一支。S蛋白氨基酸序列分析结果显示，与经典株CV777相比，HeN21株在中和抗原表位类胶原酶消化区(COE)存在11个氨基酸突变，其中K635T是其特有的突变。致病性试验结果显示，3日龄健康仔猪最早于接种HeN21株后12 h出现腹泻和呕吐，随后症状加重并死亡。感染组仔猪的直肠拭子经RT-PCR检测和PCR产物测序，全部为PEDV阳性，且小肠肠壁薄而透明，完全丧失消化吸收功能。上述结果表明，我国PEDV持续变异，且分离株具有较强的致病性，应高度重视。本研究报道的PEDV分离株为深入了解河南地区PED的流行及防控具有重要意义。同时，HeN21分离株进一步丰富了PEDV病毒库，为开发设计新型疫苗奠定了基础。

• 单位
  南阳师范学院; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所