呼吸道合胞病毒融合前F蛋白分泌表达条件的优化和建立

作者：陈玥如; 赵忆宁; 唐悦; 王剑; 王宇; 李雄雄^*

来源：微生物学免疫学进展, 2022, 50(04): 5-9.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2022.04.002

• 呼吸道合胞病毒
• 融合前RSV F蛋白
• 瞬时转染
• 条件优化

目的 通过表达条件的优化，提高融合前呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)F蛋白在HEK 293F细胞中的表达。方法 将优化后的融合前RSV F基因片段插入到pLexm载体中，构建重组表达质粒，通过瞬时转染的方式将重组质粒转入HEK293F细胞中进行表达。对转染试剂线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear, PEI)与重组质粒的比例、添加丙戊酸钠(valproic acid sodium salt, VPA)的浓度以及收获时间进行摸索和优化，通过Western blot和ELISA检测目标蛋白的表达量，确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件。结果 成功构建了含有融合前RSV F基因的重组表达质粒，并确定在重组质粒质量浓度为3.0μg/mL,DNA∶PEI为1∶0.5,在转染后24 h添加终浓度为4 mmol/L的VPA,转染后第6天收获目的蛋白的表达量最多。结论 成功构建了含有融合前RSV F基因的高效分泌表达载体，确定了目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件，为研究融合前RSV F蛋白的特性奠定了基础。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司