新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析

作者：王松豪; 郑海学; 杨帆; 曹伟军; 刘芳; 张艳; 刘华南; 郭建宏

来源：中国兽医科学, 2013, (05): 458-465.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.05.003

• 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 基因组全长cDNA克隆
• 感染性分子克隆
• 序列分析 highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus
• full genomic cDNA clone
• infectious cDNA clone
• sequence analysis

为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔...

• 单位
  农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室