不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞对心肌细胞损伤的影响

作者：吴学艳; 高鸿^*; 蒙富雪; 牛振英; 冯玉蓉; 王贵龙; 曹莹; 易菁; 佟睿; 安丽

来源：中华麻醉学杂志, 2022, 42(02): 176-180.

• 低温, 人工
• 低氧
• 成纤维细胞
• 肌细胞, 心脏
• 连接蛋白类43

目的评价不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞(RCF)对心肌细胞损伤和细胞间偶联的影响。方法体外培养RCF, 采用随机数字表方法分为3组(n=12):密度0.5×105个/ml组(T0.5组)、密度为1.0×105个/ml组(T1.0组)和密度为2.0×105个/ml组(T2.0组)。3组置于缺氧装置中, 以5 L/min的速度持续吹入95%N2+5%CO2 15 min进行缺氧处理, 然后置入4 ℃冰箱培养1 h进行低温处理;培养完成后, 置于37 ℃、含95%空气+5%CO2培养箱中复氧4 h。上述处理结束后, 3组分别与相同密度(1.0×105个/ml)的心肌细胞采用Transwell小室间接共培养16 h, 心肌细胞接种于Transwell小室下层, RCF接种于Transwell小室上层。共培养结束后, 收集心肌细胞, 采用CCK8法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡率, 实时荧光定量PCR法检测缝隙连接蛋白43(Cx43) mRNA的表达, Western blot法检测Cx43及磷酸化Cx43(p-Cx43)的表达。结果与T0.5组相比, T1.0组和T2.0组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43、p-Cx43及Cx43 mRNA表达水平降低(P<0.01);与T1.0组相比, T2.0组心肌细胞活力、细胞凋亡率、Cx43和p-Cx43表达水平降低(P<0.01), 心肌细胞Cx43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论低温缺氧复氧RCF在一定范围内呈密度依赖性地诱导心肌细胞损伤, 其机制可能与下调Cx43的表达, 降低Cx43的活性有关。

• 单位
  织金县人民医院; 六枝特区人民医院; 贵州医科大学