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摘要
为获得油棕SCoT-PCR反应的最佳反应体系以及筛选适用于该体系的SCoT引物，本研究首先通过利用L16 (45)正交设计试验和单因素实验2种方法，对反应体系中的各因子进行优化，并在此基础上确定最优退火温度和循环数。结果表明，各因子对SCoT-PCR扩增影响大小依次为：dNTPs浓度＞Mg2+浓度＞DNA模板量＞Taq DNA聚合酶量＞引物浓度；最佳反应体系(25 μL)为：DNA模板量为120 ng，dNTPs浓度0.20 mmol/L，Mg2+浓度为1.5 mmol/L，引物浓度为0.6 μl/L，Taq DNA 聚合酶量为2.0 U，其余用灭菌ddH2O补足至25 μL。最优扩增程序为：95 ℃预变性3 min；95 ℃变性30 s，55 ℃退火复性30 s，72 ℃延伸1 min，30个循环；最终72 ℃延伸5 min，保存于4 ℃恒温冰箱中。此外，利用优化体系从36条SCoT引物中筛选出30条可从油棕中扩增条带清晰的引物。使用SCoT-2等3条引物对30份油棕材料进行扩增，扩增产物均具有良好的多态性、可靠性和稳定性。本研究结果为油棕种质资源鉴定、遗传多样性分析以及品种遗传图谱构建等提供理论依据。
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