occludin的RNA干扰慢病毒载体的构建及其在紧密连接中的功能研究

作者：朱茂英; 沈建云; 费路敏; 陈德宇^*

来源：中华男科学杂志, 2021, 27(06): 499-505.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2021.06.003

• occludin
• RNA干扰
• 紧密连接

目的:体外分析occludin在紧密连接中的作用。方法:构建RNA干扰慢病毒载体,转染TM4细胞后,用RT-PCR和Western blot检测其对occuldin的抑制能力,用体外TJ细胞模型分析occuldin在TJ中功能。结果:测序结果表明pLenti 6.3-EGFP-occludin-miR表达载体已经成功构建;RT-PCR结果显示pLenti 6.3-EGFP-occludin-miR-3能够显著抑制occludin的表达(P<0.05);Western印检测分析发现pLenti 6.3-EGFP-occludin-miR-3转染组occuldin的表达值为0.7534±0.089,经ANOVA比较,较空白对照组和pLenti 6.3-EGFP转染组(1.056±0.025)都低,差异显著(P<0.05)。体外细胞TJ模型结果表明pLenti 6.3-EGFP-occludin-miR-3转染组中,TM4表达的occludin的表达受到抑制,紧密连接的紧密程度下降。结论:pLenti 6.3-EGFP-occludin-miR表达载体已经成功构建;occludin是维持紧密连接的功能蛋白之一。