新生大鼠海马神经元的分离培养及鉴定

作者：金正旭; 丁韵涵; 王小娟; 李小丽; 尹跃霏; 张德奎^*

来源：兰州大学学报(医学版), 2020, 46(03): 20-27.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2020.03.004

• 海马神经元
• 细胞培养
• 微管相关蛋白2抗体

目的探讨新生大鼠原代海马神经元的分离培养及鉴定方法。方法选取新生24 h内SD大鼠,处死后分离海马体,运用机械分离及胰蛋白酶消化法制备单细胞悬液,离心后以5.0×105/mL的密度种植于24孔板内,每3～4 d更换培养液的1 2～1 3。结果提取的原代海马神经元于24 h后贴壁,并逐渐生长为梭形;培养3 d后神经元形成突起,逐渐增多,并不断延伸;培养4 d后开始形成清晰的神经纤维网络,胞体丰满,胞体周围可见光晕,贴壁良好;培养10 d后神经元发育更加成熟,神经纤维网络更加密集。荧光显微镜下,可见微管相关蛋白在海马神经元细胞体和树突中表达,神经元细胞阳性率为95%以上。结论经改良既往实验方法,得到可培养出细胞活性高、神经元阳性率高的新生大鼠海马神经元体外培养方法。

• 单位
  兰州大学第二医院; 兰州大学; 基础医学院