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摘要
为构建一种无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)的双重荧光PCR检测方法，根据筛选的海豚链球菌LysR基因和无乳链球菌Sip基因设计特异性引物和探针，优化反应浓度和退火温度，建立标准曲线，分析方法的敏感性、特异性和重复性，最后进行方法的初步应用。结果显示：当无乳链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.16μmol/L，海豚链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.32μmol/L，且退火温度为53℃时，建立的双重荧光PCR方法荧光曲线标准，线性关系线良好，有较高的扩增反应效率；无乳链球菌和海豚链球菌最低检测限分别为29.6和10.7 CFU/mL，与猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)和其他8种常见的水生动物疫病病原体无交叉反应，重复变异系数均小于2%；临床样品及人工污染样品检测结果与细菌分离鉴定方法符合率为100%。结果表明，本研究建立的罗非鱼链球菌双重荧光PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可同时对无乳链球菌和海豚链球菌进行检测，为罗非鱼链球菌病的临床诊断和研究提供了技术支撑。
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单位东莞市动物疫病预防控制中心; 佛山科学技术学院; 中国动物卫生与流行病学中心
