杜氏盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因在棉花中的转化及分子检测

作者：孔静静; 陆许可; 赵小洁; 阴祖军; 王帅; 王德龙; 王俊娟; 樊伟丽; 张德超; 张天豹; 叶武威

来源：分子植物育种, 2015, 13(02): 301-309.

DOI：10.13271/j.mpb.013.000301

• 杜氏盐藻
• 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因
• 陆地棉
• 转化
• 分子检测

根据NCBI核酸数据库中杜氏盐藻耐盐基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(dunaliella salina glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,Ds GAPDH)的c DNA全长序列信息,本研究利用RT-PCR技术扩增克隆该基因,获得完整全长为1 131 bp并编码376个氨基酸的多肽的ORF序列。生物信息学分析表明:Ds GAPDH编码的蛋白与拟南芥、蒺藜苜蓿、玉米和葡萄等物种高度同源,分别达到90%、92%、96%和97%。构建的系统发育树结果显示,该基因编码的蛋白与团藻中该蛋白的亲缘关系最为接近。该蛋白主要由四种二级结构即α-螺旋、β-折叠、转角和无规则卷曲等组成。构建p BI121-Ds GAPDH植物表达载体,以非抗虫棉F12A、F12B和HU-749513为材料,利用基因枪活体技术转化棉花花粉,并对T0代种子进行分子检测和相关序列验证,成功获得两株阳性转基因植株,为基因枪活体转化技术研究奠定了一定的实践基础,同时也为棉花耐盐机制的研究提供了新材料。

• 单位
  中国农业科学院棉花研究所; 棉花生物学国家重点实验室