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摘要
目的探讨维生素C对脂多糖(LPS)所致脓毒症肾损伤的保护作用及机制。方法采用10 mg/L LPS分别诱导肾小管上皮HK-2细胞8 h和12 h, 之后分别加入0.5 mmol/L与1 mmol/L维生素C继续作用, 使用细胞增殖与毒性检测试剂(CCK-8)检测细胞生存率, 以确定后续的合适实验条件。将细胞分为空白对照组、LPS组和LPS+维生素C组(LPS+VC组)。采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组HK-2细胞坏死关键蛋白〔磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(p-MLKL)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶3(p-RIPK3)〕的蛋白表达, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组HK-2细胞炎症因子〔白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)〕水平, 比较各组间上述指标的差异。结果 CCK-8检测结果显示, 1 mmol/L维生素C能使LPS诱导12 h后的HK-2细胞生存率提高至86%, 故选用该条件进行后续实验。LPS诱导HK-2细胞12 h后, p-MLKL和p-RIPK3的蛋白表达均显著高于空白对照组, IL-1β、TNF-α水平也均显著高于空白对照组〔IL-1β(ng/L):23.2±1.4比12.8±3.9, TNF-α(ng/L):36.4±3.9比11.6±1.8, 均P<0.05〕, 提示细胞坏死与炎症反应同时存在;而与LPS组比较, 1 mmol/L维生素C可明显降低p-MLKL和p-RIPK3的蛋白表达, 也能明显降低IL-1β与TNF-α水平〔IL-1β(ng/L):19.8±0.7比23.2±1.4, TNF-α(ng/L):17.4±5.8比36.4±3.9, 均P<0.05〕。结论维生素C可缓解LPS诱导的HK-2细胞损伤, 降低坏死关键蛋白与炎症因子的表达。
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