重组人hSERCA2a基因腺病毒载体构建和包装

作者：王红丽; 李志强; 周贤慧; 许**; 汤宝鹏

来源：新疆医科大学学报, 2014, 37(10): 1305-1311.

• 肌浆网钙ATP酶
• 腺病毒
• 构建

目的构建携带人肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)基因重组腺病毒载体,获得重组腺病毒rAd-SERCA2a-EGFP,为进一步在细胞和动物水平研究SERCA2a基因的功能奠定基础。方法根据细菌内同源重组的方法,使用AdEasy腺病毒包装系统将人SERCA2a基因克隆到腺病毒穿梭载体质粒pshuttle-CMV中,腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV-SERCA2a线性化后与腺病毒载体pAdEasy发生同源重组,通过脂质体共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-SERCA2a,DNA测序鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定。结果通过酶切鉴定和DNA测序鉴定,证实重组腺病毒载体pAdEasy-SERCA2a-EGFP构建成功,PCR鉴定扩增出2 998bp的目的条带,rAdSERCA2a-EGFP滴度高达1×1012μg/mL。结论成功构建和包装携带hSERCA2a基因的rAd-SERCA2a-EGFP,为SERCA2a基因治疗心力衰竭动物实验及临床试验研究奠定基础。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院