重楼皂苷Ⅶ通过死亡受体通路诱导人肺腺癌循环肿瘤细胞凋亡的机制研究

作者：钱芳芳; 于盼; 上官文姬; 阙祖俊; 李鹤; 田建辉^*

来源：中药新药与临床药理, 2022, 33(10): 1289-1297.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2022.10.001

• 重楼皂苷Ⅶ
• 肺癌
• 循环肿瘤细胞
• 凋亡
• DNA损伤
• 死亡受体通路

目的 筛选 5 种临床常用抗肿瘤中药所含的单体化合物，并揭示其发挥抗肺癌转移作用的机制。方法 体外培养人肺腺癌循环肿瘤细胞 CTC-TJH-01、人肺腺癌细胞 H1975 和人支气管上皮样细胞 16HBE。采用 CCK-8 法检测 5 种中药单体(重楼皂苷Ⅶ、熊果酸、蟾毒灵、姜黄素、黄芪甲苷Ⅳ)对上述 3 种细胞的增殖抑制作用。将 CTC-TJH-01 和 H1975 细胞分别分为 DMSO 组(对照组)和重楼皂苷Ⅶ高、低浓度组(0.75、1.5 μmol·L- 1)，分别干预 24 h；采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和 Caspase-3/8/9 的活性；采用Hoechst 33342 染色法和 TUNEL 法检测细胞凋亡情况；采用 Western Blot 法检测细胞 DNA 损伤及死亡受体通路相关蛋白表达水平。结果 除黄芪甲苷Ⅳ外，不同浓度的重楼皂苷Ⅶ、熊果酸、蟾毒灵和姜黄素对 CTC-TJH-01、H1975 及 16HBE 细胞的增殖(24、48 h)均具有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。与 DMSO 组比较，重楼皂苷Ⅶ可将 CTC-TJH-01、H1975 细胞周期阻滞在 G0/G1 期(P<0.05,P<0.01)，明显诱导 CTC-TJH-01、H1975 细胞发生凋亡(P<0.001)；可诱导 CTC-TJH-01 细胞发生 DNA 损伤和细胞核固缩(P<0.001)，且 DNA损伤相关蛋白 PARP1、γ-H2AX 和死亡受体通路相关蛋白 TNF-R1、DR5 的表达显著上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),Survivin 蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.001),Caspase-3/8/9 活化水平明显提高(P<0.05,P<0.01,P<0.001)，但对 H1975 细胞的 DNA 损伤无明显影响(P>0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ主要通过死亡受体通路诱导 CTC-TJH-01、H1975 细胞发生凋亡，还可通过 DNA 损伤相关通路诱导 CTC-TJH-01 细胞发生凋亡，而H1975 细胞对重楼皂苷Ⅶ更敏感。

• 单位
  上海中医药大学; 上海中医药大学附属龙华医院; 上海交通大学医学院附属仁济医院