miR-424-5p/Rictor/mTORC信号轴诱导肝癌细胞自噬性死亡的机制

作者：梁辉; 杨金平; 范银白

来源：中国当代医药, 2022, 29(29): 5-10+14.

• miR-424-5p
• Rictor
• 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物
• 免疫荧光

目的 研究miR-424-5p/Rictor/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物(mTORC)信号轴诱导肝癌细胞自噬性死亡的机制。方法 选取肝癌细胞系Hep-3B，对照组经PBS处理，过表达miR-424-5p组、干扰miR-424-5p表达组、过表达Rictor组、干扰Rictor表达组分别转染miR-424-5p mimics、miR-424-5p inhibitor、Rictor过表达质粒、Rictor siRNA。检测细胞活性、凋亡、周期，观察切片自噬体形，检测细胞Lc3-Ⅱ、Lc3-Ⅰ、Beclin1、P62 m RNA和蛋白，RT-PCR测定miR-424-5p/Rictor/mTORC2/Akt/mTORC1的m RNA表达，Western blot法检测相关蛋白，并验证miR-424-5p与Rictor靶向关系。结果 Hep-3B细胞中miR-424-5p低表达，表达量为(0.45±0.05)。转染后过表达miR-424-5p组G0+G1期细胞高于对照组，细胞活性低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。干扰miR-424-5p表达组及过表达Rictor组G0+G1期细胞比例低于过表达miR-424-5p组，细胞活性高于过表达miR-424-5p组、干扰Rictor表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-424-5p组在488、587 nm激发波长下自噬小体、自噬溶酶体均高于对照组。过表达miR-424-5p组Rictor、mTORC2、Akt、mTORC1表达水平低于干扰miR-424-5p表达组及过表达Rictor组，高于干扰Rictor表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-424-5p组Lc3-Ⅱ、Lc3-Ⅰ、Beclin1表达水平低于另外四组，P62表达水平高于其他四组，差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-424-5p可直接抑制Rictor表达，Western blot显示miR-424-5p可抑制Hep-3B细胞内Rictor表达。结论 miR-424-5p可通过调控Rictor/mTORC2/Akt/mTORC1表达影响自噬，从而抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡。

• 单位
  南昌大学第二附属医院; 江西省赣州市人民医院; 赣州市立医院麻醉科