牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

作者：吴萌^*; 魏治静; 樊一明; 崔晨光; 李双; 董维亚

来源：中国畜牧兽医, 2020, 47(04): 1191-1198.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.04.025

• 牛血清淀粉样蛋白A
• 乳腺炎
• 荧光免疫层析
• 定量检测

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A(SAA)时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=(1.03947-0.00182)/[1+(x/12.08222)×(-0.84692)]+0.00182,线性相关系数R2=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R2为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。

• 单位
  河北省科学院生物研究所; 河北农业大学