齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

作者：郭东光; 陈明艳; 冯春花; 王丰; 卞爽丽; 李文明; 王凯露; 吕薇薇; 郑文珺; 陈子怡; 孙国鹏; 李雪华; 田金河; 李鹏; 朱艳平; 岳锋; 王选年^*

来源：动物医学进展, 2022, 43(05): 6-12.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2022.05.015

• 齐帕特罗
• 新型瘦肉精
• 半抗原
• 完全抗原
• 多克隆抗体

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原，获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后，采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联，分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后，通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清，并对抗体效价、半数抑制浓度(IC50)和特异性进行鉴定。HPLC-MS检测结果显示，改造后的主产物分子质量为348.21 u,约占整个反应体系产物的92.23%,与ZIL-丁酸盐分子质量完全相符；SDS-PAGE电泳结果显示，BSA/OVA在电泳中的迁移速率明显大于偶联产物；UV结果显示，相比载体蛋白，偶联产物ZIL-BSA/OVA的特征吸收峰均发生了明显变化；ELISA效价检测结果表明，ZIL多抗血清效价在1∶6 400以上，通过建立标准曲线测得IC50分别为0.38 ng/mL和1.13 ng/mL,并且与沙丁胺醇(SAL)、特布他林(TBL)、溴布特罗(BRO)、西马特罗(CIM)、克仑特罗(CLB)、盐酸多巴胺(DH)、莱克多巴胺(RAC)、达氟沙星(DAN)、泰乐菌素(TYL)均不存在任何交叉反应。成功制备了ZIL完全抗原ZIL-BSA/OVA,获得了一种高灵敏度和高特异性的抗ZIL pAb,为后续建立ZIL免疫学快速检测方法奠定了基础。

• 单位
  新乡学院; 生命科学技术学院; 郑州大学