CHK1 shRNA对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响

作者：张敏; 王海艳; 黎纬明; 游泳; 陈智超; 邹萍

来源：华中科技大学学报(医学版), 2008, 37(03): 351-353+357.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2008.03.019

• CHK1基因
• 基因沉默
• 细胞周期
• 细胞凋亡

目的采用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术沉默CHK1基因的表达,观察其对高表达CHK1的宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖、凋亡的影响。方法构建针对CHK1的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,将该质粒通过脂质体转染法导入HeLa细胞,以RT-PCR和Western blot法分别检测其CHK1基因和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖。结果shRNA能明显降低HeLa细胞表面CHK1的表达,与对照组和空载体转染组相比,shRNA转染组HeLa细胞CHK1 mRNA水平下降了66%,蛋白水平下降了60%(P<0.05)。此外,shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显增加,增殖活性明显降低,而且G2/M期细胞百分率显著下降。对照组、空载体转染组和shRNA转染组的G2/M期细胞百分率分别为(53.96±1.35)%、(54.08±1.39)%和(15.10±0.87)%(P<0.05)。结论CHK1shRNA能明显增加HeLa细胞的凋亡,抑制该细胞的增殖,削弱其G2/M期阻滞,为进一步研究CHK1在肿瘤治疗中的作用机制提供实验基础。

• 单位
  宜昌市中心人民医院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院