小鼠骨髓浆细胞样与髓样树突状细胞的体外培养及对比研究

作者：谭剑峰; 李东方; 郭权威; 况军; 张建华

来源：河北医学, 2021, 27(10): 1626-1631.

DOI：10.3969/j.issn.1006-6233.2021.10.009

• 髓样树突状细胞
• 浆细胞样树突状细胞
• 肿瘤细胞裂解物

目的:建立小鼠骨髓浆细胞样与髓样树突状细胞亚群的体外培养、分离及鉴定的方法,探讨小鼠骨髓树突状细胞亚群间生物学功能的差异。方法:获取C57BL/6小鼠骨髓细胞,利用重组小鼠fms样酪氨酸激酶受体3配体(rmFlt3-L)诱导其向pDC及mDC亚群分化,并利用流式细胞仪及磁珠抗体对小鼠骨髓DC亚群进行分离与鉴定,计算不同时间点细胞数量及mDC与pDC的占比,确定最佳分选时间,然后将Lewis肺癌细胞裂解物分别刺激mDC及pDC,观察DC细胞形态、利用流式细胞仪检测各组免疫表型分子的变化、ELISA法检测细胞因子的分泌情况及CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果:小鼠骨髓细胞经rmFlt3-L体外诱导培养8～9d,可获得表型为CD11c+CD11b-B220+pDC与CD11c+CD11b+B220-mDC。功能方面,在负载Lewis肺癌细胞裂解物条件下,mDC组分泌的IL-12及TNF-α均高于pDC组(P<0.05);mDC组刺激淋巴细胞增殖的能力均高于pDC组(P<0.05)。形态上,mDC体积较大,细胞核不规则,且细胞周边见较多的"突起";而pDC体积较小,呈类圆形,大部分细胞表面无"突起"。免疫表型方面,负载Lewis肺癌细胞裂解物的mDC组细胞表面CD80、CD86、CD40及MHC-Ⅱ类分子平均荧光强度值高于pDC组。结论:小鼠骨髓细胞在rmFlt3-L的刺激诱导下分化成pDC与mDC亚群,负载肿瘤细胞裂解物的mDC的生物学功能强于pDC,可能与mDC的形态成熟与共刺激分子表达上调相关。

• 单位
  南方医科大学深圳医院