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摘要
目的 筛选获取抗HER-2纳米抗体序列，偶联人IgG1 Fc片段，采用原核表达系统表达重组抗HER-2纳米抗体并验证其生物学特征。方法 基于天然噬菌体纳米抗体展示库，采用生物素-链霉亲和素液相筛选法，以生物素化HER-2抗原为靶点经三轮淘选，随机挑取单克隆进行ELISA鉴定并测序。获得抗HER-2纳米抗体序列，将其偶联人IgG1 Fc片段，并将重组抗HER-2纳米抗体序列克隆至原核表达载体pET-30a，转化至表达菌Arctic Express，诱导重组抗HER-2纳米抗体表达并纯化，采用SPR、Western blot、细胞免疫荧光对纯化后的重组抗HER-2纳米抗体特征和功能进行验证。结果 经淘选获得了一条抗HER-2纳米抗体序列，与人IgG1 Fc片段偶联，成功构建了原核表达载体，并表达纯化获得的重组抗HER-2纳米抗体；SPR显示其亲和力较好，Western blot表明其可与HER-2抗原结合，细胞免疫荧光实验结果提示其可与人乳腺癌细胞SKBR-3结合。结论 本实验获得了亲和力、特异性均良好且具有一定生物学功能的重组抗HER-2纳米抗体，可为其后续临床应用提供基础。
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