重组人tau441 (P301S)蛋白表达纯化及生物学特性分析

作者：姜家龙; 刘振武; 王子奇; 聂中梁; 李培昀; 王荷; 张莹^*; 何金生; 洪涛^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2021, 35(05).

• 阿尔茨海默病
• 微管相关蛋白
• 淀粉样蛋白聚集

目的初步了解重组人tau441 (P301S)蛋白体外聚集、抗原性及免疫原性等生物学性质。方法原核表达带His标签的tau441 (P301S)重组质粒, 镍亲和层析纯化重组蛋白, BCA测定蛋白浓度, SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色确定蛋白的纯度;采用Western blot (WB)和负染透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)鉴定;间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测所得蛋白的抗原性;以重组蛋白免疫小鼠, 检测免疫血清特异性抗体滴度来分析其免疫原性。结果所得重组人tau441 (P301S)纯度为70%, WB显示在相对分子质量(Mr.×103)64和更高相对分子质量处有特异性条带。TEM显示, tau441 (P301S)呈絮状团块聚集, 团状面积显著大于tau441野生型蛋白(t=6.439,P=0.003);4 ℃孵育9 d后, tau441 (P301S)形成明显的纤维状结构。间接ELISA结果显示, tau441 (P301S)能被tau单抗HT7(1∶80 000)识别;小鼠免疫血清tau特异性抗体滴度达到1∶128 000, 且WB显示, 免疫后血清识别阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)转基因小鼠脑裂解抽提物。结论重组人tau441 (P301S)蛋白具有体外聚集性增强的特性但其抗原性和免疫原性未改变。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 北京交通大学