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摘要
背景多种claudin亚型与血-视网膜屏障的功能密切相关,参与病理性新生血管的形成,从而导致多种视网膜血管性病变的发生。Claudin-23是近年来新发现的claudin亚型,研究其在视网膜中的定位、表达及其与视网膜血管病变的关系对相关病变的靶向治疗具有重要的临床意义。目的探讨氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜中claudin-23的动态表达变化。方法将生后第7天(P7)的SPF级C57BL/6J乳鼠与母鼠放入含氧体积分数为75%±3%的密闭饲养箱中饲养5d建立小鼠OIR模型,用50g/L异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran)行小鼠眶后注射并行全视网膜铺片,检测成模后缺氧小鼠的视网膜血管情况并与正常小鼠进行对照。采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法检测P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23 mRNA及蛋白的表达,采用real-time PCR法检测claudin-23 mRNA在小鼠视网膜中的动态表达;制备P7小鼠视网膜冰冻切片,用免疫荧光双染法检测claudin-23在正常对照组和OIR模型组小鼠视网膜中的表达定位。结果 OIR模型组P17小鼠全视网膜铺片可见视网膜大血管迂曲、扩张,后极部视网膜出现无灌注区,周边部血管网状结构紊乱或消失,出现大量病理性新生血管。正常对照组小鼠随着日龄的增加,视网膜中claudin-23 mRNA的表达量增加缓慢,P25时的表达量是P7时的2.3倍,蛋白表达则先增加后减少,在P12出现高峰;OIR模型组小鼠随日龄的增加claudin-23 mRNA和蛋白的表达水平均快速增加,claudin-23mRNA在P25的表达量较P7增加12.5倍。正常P7小鼠与OIR模型组P7小鼠claudin-23 mRNA和蛋白的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05),但OIR模型组P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23 mRNA的表达量均明显高于同龄正常对照组小鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);P25时,claudin-23蛋白的表达量明显高于同龄正常对照组小鼠,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常对照组小鼠claudin-23主要分布于内核层和视网膜神经节细胞层,OIR模型组在视网膜神经节细胞层和内核层的表达明显增强,两组claudin-23与血管标志物Isolectin B4均无共定位。结论 OIR模型鼠claudin-23在视网膜中的表达明显上调,claudin-23的表达主要位于视网膜神经细胞而不是血管内皮细胞。
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单位中山大学中山眼科中心; 眼科学国家重点实验室
