利用DREAM设计和同源重组进行一步定点突变

作者：张宝中; 冉多良; 刘大斌; 王盛; 张昕; 安小平; 周育森; 童贻刚

来源：中国生物工程杂志, 2008, (11): 77-81.

DOI：10.13523/j.cb.20081115

• 定点突变
• 同源重组
• 突变子筛选 Site-directed mutagenesis Homologous recombination Mutant screening

目的:建立基于DREAM设计和同源重组的简便、快速定点突变方法。方法:设计两条包含突变的反向PCR(inverse PCR)引物,使其5′端互补从而产生同源重组,同时使用DREAM设计方案在上述引物中引入限制性内切酶位点以便突变子筛选。用能扩增长片段的高保真耐热DNA聚合酶扩增全长的质粒DNA,直接转化大肠杆菌。转化到细菌中的全长质粒DNA PCR产物可利用其末端同源序列发生同源重组而环化。利用引入的酶切位点方便地进行突变子的筛选。结果:用该方法成功地对长度大于7kb的质粒进行了定点突变。结论:本定点突变无需任何突变试剂盒和特殊的试剂,只需一步反应即可完成;利用DREAM设计使克隆筛选简便可靠...

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 新疆农业大学