FOXO4过表达慢病毒载体构建及顺铂耐药稳定细胞株的建立

作者：尹秋玉; 朱雅婷; 许文婷; 欧江华^*

来源：新疆医科大学学报, 2023, 46(01): 56-62.

• FOXO4
• 慢病毒转染
• 乳腺癌
• 顺铂耐药

目的 构建稳定过表达叉头框基因O4(FOXO4)的顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP,探讨FOXO4在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞顺铂耐药中的作用，为改善TNBC顺铂耐药提供理论基础。方法 通过药物剂量递增法诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231获得顺铂耐药性，CCK-8法确定细胞的耐药指数。将目的基因FOXO4定向插入载体质粒GV492中构建重组慢病毒表达载体LV-FOXO4-OERNA。通过预实验选取助感液类型、确定感染的最佳转染复数值(MOI)以及嘌呤霉素筛选的最佳浓度。将重组慢病毒表达载体感染MDA-MB-231/DDP细胞，嘌呤霉素最佳浓度筛选FOXO4过表达细胞株(FOXO4-OERNA组)。qRT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况，测定不同组IC50确定细胞对顺铂敏感性。结果 成功建立乳腺癌顺铂耐药细胞株(耐药指数=5.231)。与亲本细胞株相比，MDA-MB-231/DDP耐药细胞株FOXO4 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。通过基因测序证明，序列与预计序列一致，重组慢病毒表达载体构建成功，通过嘌呤霉素成功筛选出FOXO4稳定表达株。通过过表达FOXO4可以降低MDA-MB-231细胞对顺铂的耐药性，FOXO4-OERNA组耐药指数(RI=3.063),逆转指数达到1.708。结论 通过药物剂量递增法可建立MDA-MB-231顺铂耐药细胞株，过表达FOXO4可逆转MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的耐药性。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院; 新疆医科大学