SOD1真核表达载体的构建及表达

作者：吴雄辉; 孙虹; 邢晓为; 黄利华

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2010, (10): 962-965.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005619

• 铜锌超氧化物歧化酶
• 载体构建
• 基因转染
• 基因表达
• 基因治疗 SOD1
• vector construction
• gene transfection
• gene expression
• gene therapy

目的:构建人铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因真核表达载体,并在HeLa细胞中进行表达。方法:应用RT-PCR从人外周血中扩增SOD1基因开放阅读框(ORF),采用TA克隆技术,将目的片段插入到pUCm-T载体中进行鉴定,重组的质粒命名为pUCm-T-SOD1。随后,将SOD1进一步克隆到真核表达载体pTracer-CMV/Bsd中。用脂质体将经过测序、验证的重组pTracer-CMV/Bsd-SOD1质粒转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,转染HeLa细胞,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选4周,用RT-PCR、Western blot检测SOD1的表达。结果:成功...

• 单位
  中南大学湘雅三医院