猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM株Nsp2基因缺失片段的原核表达及免疫活性分析

作者：黄双; 王凤雪; 温永俊; 高维凡

来源：动物医学进展, 2014, 35(03): 15-18.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2014.03.004

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• Nsp2基因
• 原核表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株在细胞克隆纯化后得到非结构蛋白2(Nsp2)缺失的致弱毒株TJM株,根据GenBank数据库中公布的PRRSV TJ株F3代全基因序列设计合成引物,采用RTPCR方法扩增了PRRSV TJM株缺失片段dNsp2,利用原核表达载体pGEX-6p-1构建重组质粒GSTdNsp2,将重组质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,获得了可溶性表达的融合蛋白(GST-dNsp2)。经亲和柱层析纯化后,得到纯化的GST-dNsp2蛋白,含量1.6mg/mL。用PreScissionTM蛋白酶对融合蛋白GST-dNsp2进行解离,获得浓度为0.41mg/mL的目的蛋白dNsp2。对GST-dNsp2及dNsp2进行Western blot鉴定,证明表达的蛋白具有良好的反应性。本研究获得的GST-dNsp2及dNsp2为ELISA方法鉴别检测PRRSV TJ株与TJM株提供了基础资料。

• 单位
  分子生物学国家重点实验室; 中国农业科学院特产研究所; 沈阳农业大学