口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达

作者：马江涛; 卢曾军; 曹轶梅; 郭慧琛; 郭建宏; 祝秀梅; 刘在新; 杨孝朴

来源：甘肃农业大学学报, 2007, (04): 5-10.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2007.04.020

• 口蹄疫病毒
• 3ABC基因
• 杆状病毒
• Sf9细胞 foot-and-mouth disease virus(FMDV)
• 3ABC gene
• baculovirus
• Sf9 cell

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学