广州地区GII.4 Sydney 2012[P31]型诺如病毒GZ2013-L10毒株病毒样颗粒功能和免疫原性鉴定

作者：王林平; 高珺珊; 薛亮^*; 梁燕惠; 洪晓静; 张菊梅; 任羽; 吴清平^*

来源：微生物学通报, 2022, 49(06): 2256-2265.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.210900

• 诺如病毒
• 病毒样颗粒
• 功能鉴定
• 免疫原性
• 抗血清

【背景】诺如病毒(Norovirus,NoV)是全球范围内引起急性胃肠炎暴发的主要病原体之一，其中GII.4型通过不断变异在人群中持续存在并占据诺如病毒感染的主导地位，尤其GII.4 Sydney 2012[P31]变异株自2012年出现以来在全球各地持续流行至今。【目的】制备广州地区GII.4 Sydney 2012[P31]型诺如病毒毒株GZ2013-L10的病毒样颗粒(virus like particle,VLP)，并系统表征其功能及免疫原性特点。【方法】从毒株GZ2013-L10中扩增ORF2基因并克隆构建重组转座载体PFast Bac1-L10-ORF2，进一步转化至大肠杆菌DH10Bac构建重组杆状病毒质粒，进而在昆虫细胞sf9中表达病毒样颗粒并通过超速离心纯化，最后经透射电镜、Western blotting和受体结合实验对病毒样颗粒进行表征。此外，将免疫小鼠获得的病毒抗血清通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和受体结合阻断试验进行验证。【结果】成功构建了重组杆状病毒质粒Bacmid-L10-ORF2并获得病毒样颗粒，电镜结果表明病毒样颗粒直径约为30 nm,SDS-PAGE和Western blotting显示蛋白大小约为58 k Da。受体结合实验结果显示，病毒样颗粒能与A/B/O等分泌型唾液受体及猪胃黏膜蛋白结合，而与非分泌型唾液受体均不结合。免疫小鼠获得效价为1.3×10~5的抗血清，但ELISA结果显示其与不同基因型诺如病毒衣壳蛋白无交叉免疫活性。此外，抗血清对同型病毒样颗粒具有受体中和阻断作用，但对不同型别病毒样颗粒(包括GII.8、GII.17和GII.3)无中和效果。【结论】本研究制备并系统表征了广州地区GZ2013-L10毒株的病毒样颗粒及其抗血清，其研究结果可为解析其流行原因以及疫苗研发提供参考。

• 单位
  喀什大学; 广东省科学院