缝隙连接蛋白43在骨髓间充质干细胞和关节软骨细胞共培养中的表达及其对软骨分化的影响

作者：赵文慧; 李辉; 张绍公; 吴纯江; 张明; 朱霞; 冯万文^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, (12).

• 骨髓间充质干细胞
• 软骨细胞
• 共培养
• 连接蛋白43
• 软骨分化

目的 观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)和关节软骨细胞(ACs)共培养中的表达和对软骨分化的影响。方法 取第二代新西兰白兔BMSCs和ACs,细胞总量4×104,以3∶1的比例进行接触共培养21 d为实验组,应用Transwell培养板进行非接触共培养为对照组,向两组添加Cx43阻断剂18ɑ-甘草次酸(GA)50 μmol/L进行干预共培养21 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析糖胺聚糖(GAG)的含量,细胞免疫化学(ICC)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Cx43和Ⅱ型胶原a1(Col2a1)的分布和表达。结果 BMSCs和ACs共培养21 d,实验组GAG含量、Cx43和Col2a1表达明显高于对照组[(327.517±24.612) ng/L比(171.612±13.163) ng/L,t＝13.683,P<0.05；0.694±0.036比0.522±0.036,t＝8.203,P<0.05；0.684±0.046比0.415±0.039,t＝10.915,P<0.05]。添加GA共培养21 d,接触共培养＋GA组GAG含量和COL2a1表达与非接触共培养＋GA组比较,差异无统计学意义[(144.671±5.229) ng/L比(138.270±5.542) ng/L,t＝2.058,P>0.05；0.240±0.028比0.223±0.026,t＝1.086,P>0.05]；而与未添加GA比较,两组GAG含量和Col2a1表达均明显降低(t＝17.541、6.015,P<0.05),Cx43的表达(0.671±0.029,0.505±0.030)均无明显变化(t＝1.454,1.139,P>0.05)。结论 Cx43在BMSCs和ACs接触共培养中的表达上调,Cx43促进共培养细胞的软骨分化,在调控共培养细胞的软骨分化中起主要作用。

• 单位
  南京医科大学康达学院