影响PVDF膜对蛋白吸附效率的主要因素

作者：袁玉琦; 张巨源; 王莉; 陈雯莉

来源：氨基酸和生物资源, 2015, 37(03): 51-56.

DOI：10.14188/j.ajsh.2015.03.011

• 抗体纯化
• PVDF膜
• 蛋白吸附

通过结合有抗原的PVDF膜进行亲和纯化是小规模快速获取特异性抗体的一种重要手段。该方法的关键步骤之一是将抗原蛋白有效地吸附到PVDF膜上。尽管人们广泛使用PVDF膜亲和纯化抗体,但对影响PVDF膜吸附抗原蛋白的因素至今仍缺乏系统研究。以BSA为模型蛋白,检测在不同蛋白浓度、不同孵育时间、不同溶质溶液和不同pH值的情况下,PVDF膜吸附蛋白的效率。当蛋白溶液为PBS时,1cm2 PVDF膜与2mg·mL-1 BSA溶液孵育1h可达到其最大吸附率。常见的蛋白质缓冲液组分对PVDF膜的蛋白吸附率影响不一。其中,咪唑、Tris-HCl、NaCl、KCl在广泛的浓度范围内对PVDF膜吸附蛋白没有明显影响,而较高浓度的SDS、Triton-X 100、Tween-20、乙二醇、甘油、盐酸胍、尿素等可显著降低PVDF膜对蛋白的吸附效率,在pH为6.59.5的Tris-HCl中,随着pH的增高而吸附效率降低。

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室; 华中农业大学