IL-1β参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡的研究

作者：蔡卫卫; 马臣杰; 曾瑾; 吴晓玲^*; 邓光存^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(04): 386-393.

DOI：10.13350/j.cjpb.190403

• IL-1β
• RAW264.7细胞
• BCG
• 细胞凋亡

目的白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)属多肽类生长因子,主要由单核细胞和巨噬细胞分泌。IL-1β可参与细胞分化、增殖等多种细胞的生命活动,并参与调控细胞凋亡过程。本研究旨在探讨IL-1β参与卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡作用及其机制。方法设计并合成IL-1β的小干扰RNA(si-IL-1β),转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后并用BCG感染,采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,ELISA法检测细胞培养液上清中IL-1β的分泌水平,DCF法检测细胞内ROS水平,AnnexinV-FITC/碘化丙啶(propidine iodide,PI)双荧光染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot法检测凋亡相关因子Caspase3、Bad、Bax以及Mcl-1蛋白及其基因(mRNA)的表达。结果 BCG感染巨噬细胞24 h后,IL-1β表达水平极显著上调,并且呈时间梯度依赖性(P<0.01);同时,与对照相比,BCG感染后巨噬细胞存活率下降,约为33%,而凋亡率显著上调到58.56%(P<0.01),并且凋亡关键调控因子Caspase3、Bad、Bax的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而抑凋亡蛋白Mcl-1的表达水平显著下调(P<0.01),细胞内ROS富集(P<0.05),而si-IL-1β处理可显著逆转由BCG诱发的细胞凋亡、ROS含量富集及凋亡相关蛋白表达水平上调等。结论 BCG可诱导细胞内IL-1β的表达;IL-1β通过上调促凋亡蛋白Bad、Bax表达,下调抑凋亡蛋白Mcl-1表达,上调细胞内ROS的表达并参与调控BCG诱导的巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡。这为阐明IL-1β在BCG诱导的细胞凋亡中的作用奠定了分子基础。

• 单位
  宁夏大学; 生命科学学院