RACK1干扰质粒的构建及其干扰效率的鉴定

作者：邹晏; 鲁芳; 刘延友; 汪宇辉; 甘露; 付天明; 王正荣

来源：航天医学与医学工程, 2008, (02): 117-120.

DOI：10.16289/j.cnki.1002-0837.2008.02.001

• 生物节律
• 干扰质粒
• RNA干扰
• RT-PCR
• Gnb2l1基因

目的构建高效针对RACK1(Gnb2l1基因)的干扰质粒,为进一步研究RACK1功能构建有效平台。方法采用M-folder生物软件选择2个Gnb2l1干扰位点,根据位点序列合成2个干扰片段及1个阴性对照片段,定向克隆入pGenesil-1干扰载体并测序验证。将干扰及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞后,实时定量RT-PCR鉴定干扰效率。结果实时定量RT-PCR结果显示,干扰质粒转染组的Gnb2l1mRNA量分别为未转染组的58%和7%,阴性对照质粒转染组与未转染组一致,提示干扰质粒pGene-sil-1/Gnb2l1-Ⅱ干扰效率达到90%以上。结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的干扰质粒,为进一步研究RACK1及其伴侣分子的功能联系奠定了基础。

• 单位
  华西医学中心; 四川大学; 四川省人民医院