牛病毒性腹泻病毒LAMP-LFD检测方法的建立及初步应用

作者：郑如雯; 黄涛^*; 吴道义; 禹光美; 李芳芳; 隋鑫; 闵婷玉

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4745-4753.

• 传染病
• 牛病毒性腹泻病毒
• 环介导等温扩增技术
• 横向流动试纸条

旨在建立一种用于牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)的特异、灵敏、快速、简便的检测方法。试验利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification LAMP)与横向流动层析试纸(lateral flow dipstick, LFD)相结合的技术，根据BVDV 5′UTR序列保守区段设计4条LAMP特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针，再利用LFD检测扩增产物。通过对反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg2+浓度等优化后对该方法的特异性及检测灵敏度进行分析并对52份临床样本进行检测，建立了检测BVDV的LAMP-LFD方法。结果显示：LAMP-LFD可特异性检测BVDV,而口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛疱疹病毒1型等均未检出。LAMP-LFD的敏感性较高，对pUC57-5′UTR质粒最低检测浓度为1.9×101拷贝·μL-1。LAMP-LFD与PCR两种检测方法均检测出5份阳性，符合率为100%。本试验成功建立了用于BVDV快速检测的LAMP-LFD方法，该检测方法检测时间短，特异性强，操作简单，灵敏性高，可作为一种新型检测方法应用于基层检测。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院